一代PARP1抑制劑能靶向PARP1/PAPR2，為非選擇性抑制劑，目前已有多款藥物先后上市，如Olaparib（Merck/AZ）、Niraparib（GSK/Zai lab）、Rucaparib（Clovis）、Talazoparib（Pfizer/Medivation）、氟唑帕利（恒瑞）、帕米帕利（百濟）等。這類藥物在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等適應(yīng)癥上獲得成功，證明了PARP1/PAPR2是極具價值的合成致死藥物靶點，但其脫靶效應(yīng)所導致的安全性風險，如貧血、血小板減少、中性粒細胞減少等限制了使用。以阿斯利康A(chǔ)ZD5305為首的選擇性靶向PARP1抑制劑目前正在臨床研究階段，已顯示出更好的靶向性和安全性，以及富有吸引力的藥效學結(jié)果。

本文將針對文獻所披露的一代、二代PARP1抑制劑的相關(guān)資料進行分析，并結(jié)合熙寧生物|精翰生物二代PARP1抑制劑的臨床藥效學評估實踐，對合成致死靶點臨床藥效學評估的邏輯進行系統(tǒng)性介紹。

PART 01

雙鏈DNA斷裂（DSB）會導致PARP1被招募到有缺口的DNA，并被迅速激活，導致包括其自身在內(nèi)的多種蛋白發(fā)生PARylation修飾，從而啟動DNA修復機制。雙鏈斷裂（DSB）修復缺陷的癌細胞，如BRCA1/2突變細胞，基于“合成致死”的機理，對PARP1抑制劑格外敏感。

PARP1抑制劑可以抑制PARP1活性，會導致雙鏈DNA修復信號通路多種蛋白的PARylation修飾減少?；谒幬镒饔迷?，檢測用藥前后患者PBMC中PAR（Poly ADP-ribose）的水平是一代PARP1臨床藥效學評估的經(jīng)典技術(shù)路徑。相關(guān)文獻披露了兩種檢測方法以及一種改良方法：

Rucaparib (AG014699)采用體外酶催化反應(yīng)檢測方法，將用藥后的人PBMC加入NAD+ 和oligonucleotide進行體外刺激酶催化反應(yīng)，將反應(yīng)后的產(chǎn)物使用western blot進行半定量檢測。

Veliparib采用的是分離用藥前后的PBMC細胞，在裂解PBMC變性蛋白后，使用ELISA對PAR進行定量檢測。依據(jù)的方法為NIH公開披露的經(jīng)驗證的PAR檢測免疫學方法。

鑒于方法二對ELISA檢測PAR的靈敏度要求較高，Rosemarie de Haan等建立了新的方法，即在用藥前后的PBMC中加入有藥物的血漿進行輻照，然后再進行PBMC分離裂解，待PBMC蛋白變性后，使用ELISA對PAR進行定量檢測。

總結(jié)下來，一代PARP1抑制劑的PD方法學，因為樣品時效性要求、PBMC需要體外反應(yīng)、方法學靈敏度要求高、儀器設(shè)備可及性等原因，要做出藥物和PAR水平的顯著性藥效相關(guān)性難度較高，方法學穩(wěn)固性和重現(xiàn)性較差。

PART 02

創(chuàng)新的藥物需要有適配的創(chuàng)新型臨床藥效學PD方法來進行表征，AZD5305披露的PARP1的數(shù)據(jù)中，20mg劑量組有66.7%受試者能達到90%抑制率，60mg劑量組有84.6%試者能達到90%抑制率，較之前的一代PARP1抑制劑對PAR抑制作用有極為顯著的提升。

AZD5035如此優(yōu)秀的PD數(shù)據(jù)，除了藥物本身的藥效作用外，從方法學角度來說，該創(chuàng)新型的方法學進行了前處理，放大了信號值，同時利用新的MSD方法降低了檢測下限，這是最大抑制率能夠達到90%以上的關(guān)鍵。

熙寧生物|精翰生物基于一代PARP1藥效學方法的經(jīng)驗，以及AZD藥效方法學在實際臨床生物分析過程中可能會遇到的問題，開發(fā)了創(chuàng)新型的PARP1抑制劑臨床藥效學方法，實驗體系如下：

該方法學與一代PARP1的方法學三類似，進行了全血刺激前處理。同時，由于某產(chǎn)商的PAR檢測試劑盒產(chǎn)品升級迭代，不適用于全血基質(zhì)中PAR檢測，我們重新篩選PAR抗體對，建立了高靈敏度抗干擾的ELISA檢測方法。該PARP1方法學已經(jīng)過全驗證且成功應(yīng)用于臨床樣品分析，取得了非常好的藥效學數(shù)據(jù)。全血基質(zhì)中典型的藥效曲線如下：

相對于AZD方法學分離PBMC后再裂解進行體外信號放大，熙寧生物|精翰生物的方法學使用全血刺激進行信號放大，保留了全血中的藥物，使其持續(xù)發(fā)揮藥效學作用，其生理學相關(guān)性和方法穩(wěn)固性更好。

同時，對于PARP1藥效學方法對于樣品的時效性和結(jié)果穩(wěn)定性要求，熙寧生物|精翰生物也在臨床樣品分析的全流程中建立了周期管理，如下圖包括全血采集穩(wěn)定性，白細胞凍存穩(wěn)定性，白細胞裂解的操作流程等。

PART 03

使用人來源基質(zhì)進行藥效學評估，可以避免動物模型的種屬差異，對于人體的反應(yīng)有非常好的預測性作用，在藥物的成藥性評估上起到了越來越重要的作用，在進行同類對標陽性藥物和候選藥物的藥效比較中，更具有生理相關(guān)性的優(yōu)勢；同時對于預測候選藥物和同類對標藥物在臨床的表現(xiàn)，可以提供較多的有價值信息。同時也能對藥物在臨床一期的起效劑量和飽和藥效劑量進行預測。

在臨床一期藥物藥效學方法開發(fā)階段，經(jīng)過嚴格和充分驗證的方法學，可以提供較為精密的臨床一期藥效學數(shù)據(jù)，對于二期藥物劑量的選擇也有很大的參考價值。

熙寧生物|精翰生物在基于人全血基質(zhì)的藥效學生物分析檢測的方法開發(fā)，驗證和樣品分析方面有著豐富的經(jīng)驗。我們可以提供臨床前和臨床階段全血基質(zhì)的藥效學方案設(shè)計和藥效檢測服務(wù)，還能夠為候選藥物分子的成藥性評估，臨床一期二期的藥物劑量設(shè)計決策提供專業(yè)化的轉(zhuǎn)化醫(yī)學服務(wù)。歡迎后臺留言咨詢。

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